云克隆技术分享｜基于 Luminex 技术的多因子检测：原理与实验流程详解

引言

以 Luminex xMAP 平台为核心的多因子检测技术，能够在单份生物样本中同步定量检测数十至上百种分析物，涵盖细胞因子、趋化因子、疾病标志物等各类蛋白指标。相较于传统单因子ELISA方法，该技术显著减少了样本消耗、缩短了实验时长，能够为系统生物学研究、生物标志物筛选、临床前药效评估等工作提供高效、多维度的数据支撑。本文将从核心原理、实验流程及主流商业化平台三大板块，对该技术进行全面解析。

一、核心技术原理：荧光编码微球 + 双抗体夹心体系

多因子检测技术的核心在于将“流式细胞术的单颗粒检测原理”与“免疫分析的双抗体夹心法”相结合，其反应体系的核心构成包括：编码微球、捕获抗体、待测物、生物素化检测抗体、PE-链霉亲和素。核心组分及功能如下：

• 荧光编码微球（Luminex Bead）
  采用聚苯乙烯或磁性材质微球，内部包埋两种荧光染料。通过精确调配两种染料的配比，可生成数百种荧光编码各不相同的微球，每种编码对应一类专用微球。产品在出厂前，已将靶向不同指标的捕获抗体共价偶联至对应编码的微球表面，从而实现微球编码与检测靶点的一一对应。

• 捕获抗体（Capture Antibody）
  预先固定在微球表面的特异性抗体，能够精准识别目标分析物的某一抗原表位，将待测物质特异性地结合在微球载体上。

• 待测物-目标蛋白（Target Analyte）
  要测的指标，既能被捕获抗体识别，会被另一个 “生物素的检测抗体” 夹住，形成 “夹心”。

• 生物素化检测抗体（Biotinylated Detection Antibody）
  该抗体针对同一分析物的另一抗原表位，可与已结合在微球上的目标物质配对，与捕获抗体共同形成“捕获抗体—目标分析物—检测抗体”的夹心结构。抗体分子上标记的生物素是后续荧光信号结合的关键位点。

• 链霉亲和素-藻红蛋白（Streptavidin-PE, SA-PE）
  作为荧光信号报告分子，SA-PE能够与生物素发生特异性且高亲和力的结合。其携带的藻红蛋白（PE）荧光基团受光激发后产生荧光信号，信号强度与微球表面结合的目标分析物浓度呈正相关，从而实现对分析物的定量检测。

                                                 流式荧光免疫检测(FLIA) 检测原理

二、分步实验流程

Step 1：微球捕获目标分析物
向96孔板的反应孔中加入混合好的编码微球液，再注入待测样本（如血清、细胞上清、组织匀浆等生物样本）。经过充分孵育，样本中的各类目标分析物会特异性地结合至对应微球的捕获抗体上。孵育完成后进行洗涤，去除未结合的杂质，降低背景干扰。

Step 2：夹心复合物的构建
向反应体系中加入生物素化检测抗体工作液（检测溶液 A），该抗体与已被捕获的目标分析物结合，从而完整构建起夹心复合物结构。再次孵育后进行洗涤，清除体系中游离的检测抗体，避免非特异性结合带来的信号偏差。

Step 3：信号标记与双参数检测
加入SA-PE反应液（检测溶液 B），利用链霉亲和素与生物素的特异性相互作用，将荧光标记结合至夹心复合物表面。随后将样本置于Luminex检测仪中进行检测。仪器对每一颗微球同步完成两项检测：

• 微球身份识别（分类读数）
  仪器以特定波长（621 nm 和 511 nm）激发光照射微球，激发微球内部的编码荧光，根据荧光信号判定微球编码，从而确定其对应的检测靶点。

• 分析物定量（信号读数）
  激发微球表面的PE荧光基团并采集信号强度。结合标准曲线，即可将荧光数值换算为样本中各分析物的实际浓度。

最终，设备配套软件整合全部微球的编码信息与荧光数据，一次性输出所有检测指标的定量结果。

武汉云克隆科技股份有限公司官方网站https://www.cloud-clone.cn/