近年来单细胞测序得到了飞跃式的发展,其横向上扩展到其他层面,如用于表观基因组分析的单细胞亚硫酸盐测序,纵向上扩展到多个组学数据整合和其他信息的整合,如空间转录组。近日,《Briefings in Functional Genomics》发表了一篇综述文章,系统地涵盖了单细胞测序中使用的技术和算法,并从横向和纵向两个维度上进行了扩展,还从助力癌症研究这一转化方向做了介绍。

单细胞转录组测序
scRNA-Seq是第一个建立的单细胞测序技术,已获得广泛的应用。2014-2015年期间,scRNA-Seq技术发展的突飞猛进促进了单细胞测序领域的发展。

单细胞测序技术开发过程中的关键事件
scRNA序列由四个主要步骤组成,即单细胞分离、逆转录、cDNA扩增和文库构建:
1)分离单个细胞有五种方法,即人工细胞选择、随机接种/稀释、激光显微切割、荧光激活细胞分选(FACS)和微流体/微板法,其中FACS是最常用的方法。
2)逆转录和cDNA扩增可以使用三种方法进行:Tang’s method、体外转录:IVT(CEL-Seq和CEL-Seq2)、MMLV-TS(Smart-Seq、Smart-Seq2和STRT-Seq)。
3)作为单细胞测序的一个独特步骤,单细胞被贴上一个独特的条形码,以汇集不同的样本而不致混淆,从而在同一测序通道上分析多个样

单细胞测序技术在癌症研究中发挥重要作用,从scRNA-Seq的飞速发展到多组学整合,包括基因组、表观基因组、蛋白质组和代谢组。技术扩展到空间转录组学,与非单细胞数据整合,用于识别生物标志物和治疗策略。通过scRNA-Seq,研究人员能够深入理解肿瘤微环境(TME),揭示治疗耐药性和药物反应的细胞异质性,推动个性化治疗的发展。
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