���ٷ�����| | | | | ��΢Ⱥ|
��ע����
��վ�ͻ�����

���Ͽͷ������

�DZ�����΢

ɨһɨ��ע����

|
�ͻ���
�DZ�APP

��׿��

�DZ��ֻ���

�ֻ����ʸ����

�DZ�����

�������� ���״���


�����ڵ�λ�ã��DZ���>�ϳ��豸>�����б�>��CEM MultiPep��SPOT �ϳɵ���������

��CEM MultiPep��SPOT �ϳɵ���������

2024��04��08�� 14:54:41 ����: 774 ��Դ: �ల���޹�˾

01



ʲô��SPOT�ϳɣ�

What is SPOT synthesis?

SPOT ������ Ronald Frank �����������ھ���Ĥ�����ϵIJ�ͬλ��ͬʱ�ϳɶ��ġ��ü�����ԭ���ǽ�Ԥ��İ������������СҺ�η��䵽���Ĥ��Ԥ�����λ�������ϡ�Һ�α����ղ��γɵ����ķ�Ӧ�ң����ڹ���ϳ��еĻ�ѧ��Ӧ��������ͬ�ĵ����������һ��Ĥ�ϣ�������Щ���е�ÿһ��������ͨ����Ӧ�Լ���Һ���ֶ����Զ�����������������ÿ������ĵ����͵��С��Ĥ������������Һ�ε�������������ݻ��ʵ��ض����ܣ����С��ϳɵ��ض���ģ��ء� Ronald Frank ���ʹ�õ���Ĥ��Ȼ��ީ�ܻ�ӭ�����壬�ɸ�����ά����ֽ�Ƴɡ�


�� MultiPep 1&2 �ϳ����Ϻϳ���������һ�ִ��������ĵ������ҷ���ķ���������ͨ���������Һ�εij�������ά��Ĥ֧�����Ϻϳɡ���֮ǰ��ȣ�Ĥ�Ͱ�������֮��ļ������ȶ����ϵõ��˸����������ڶ� 100% �����������ȶ��������ڼ��������½������鲻�ᵼ������ʧ���ü����ܱ��и����ͷ��ġ��ı��ֹ������ӣ�������Խ����������ơ��м��ַ������Ի�ȡ�йغϳ���������Ϣ��

638481838119503290868.png

02



�ϳ����λ����

Synthesize and analyze some epitopes

����������һЩ��֪������ǰ����Ŀ�������õ��ģ�����Ҳ��Ҫ������һЩ���塣һ�ָ��򵥵ķ�����������ù�׺���ʶ��� Strep-tag��Ȼ�����ʹ��ͨ�õ���ù�׺��ر���ż������м�⡣ͨ���ض̱�λ����ʵ�ֲ�ͬ���ź�ǿ�Ȼ��׺�����Strep-tag II �����������ǣ�NWSHPQFEK�����ҿ��Լ�⵽������һ�������е� HPQ ���ġ�

03



��ϱ������

Couple a reporter molecule

ͨ����ÿ���ϳ������ж���һ�����������裬�ò���Ӧ�ⶥ����δ��Ӧ����������������صĺϳ����⣬�ں���ĺϳɲ����оͻ���������ķⶥ�������������κ�����İ�������ˣ�N�˵ı�����ӽ������󲿷ֺϳ��������ġ����õı��������

  • ��ţ���أ��ü򵥵���ͨ��ù�׺���-�������������

  • ��ù�׺��ر��湲����Ҳ�ܼ�⵽ N �˵���ù��ǩII(NWSHPQFEK)��

  • �޵���Ⱦ�ϣ��񰱻���һ��������ϣ����չ������¿ɼ�

04



�ںϳɹ����н���һЩ���

Perform some checks during synthesis

�ֲ��н������ںϳɹ����й۲����백�������Ⱦɫ���衣�����֮������Һ��û�м���������������� DMF �еļ�ϡ����Һ��1% ��Һ��1:100 ϡ�ͣ���Ĥ����Ⱦɫ���ߵ�Ӧ��ʾΪ����ɫ����ǿ�������ж��仯���ɽ���ĤӰӡ����ӽ�ü�¼һЩ��صĺϳɲ��衣��������ʹ���ֳ�ʽ��������۲�ϳɺ���ġ��ر���ɫ���ω�����������������»ᷢ�⡣��������ƺ������򵽶��Ҽ۸���ˡ�ͨ���ɿ���ѧ��ʹ�û������鳮��

��ͼΪ�̲��� LUYOR-3410 �����ߵ������¹۲쵽��Ч��

05



����һЩ�ο���

Analyze some reference peptides

�������г������ߵ㣬������а�������������á���Ϣ��������ʿط����� MALDI ��������һЩ���� C ���� Lys-Gly ��β�������������ѱ��������°ߵ㣬���ȵ�����ÿȥ���ġ������õ�����Һ�м�ʹֻ�аٷ�֮�����ı��ͷų�����Ҳ���Խ��� MALDI��������ע�⣬����������� Lys�� Arg �л�����Ҳ�����ڲ����жϡ�����ڵ�һ��ѭ��������һ�����ѽ��������(�� Rink ����������)���������Ķ������÷�ʽ֬�����ͷų���������������£������ڲ����ѱ���֮ǰ�����и�����������������ͷŵ���Ҳ�������� HPLC ������

06



һ��������

General remarks

SPOT �ϳɵ�����Ķγ���Ϊ 10 �� 25 ���л�������������Ⱥ������ͻ������½�����Ϊ�������е����������������롣���� RudolfVolkmer С�����ϸ������ʾ����ά�������׻�õ������������������� 50 ���л��ij��ȡ�����������£�ͨ�� Fmoc-�� Boc-beta- �����ω��������ϣ�Ĥ�ij�ʼ����������Ӧ���� 10-100 �����ĵ�ԭʼ������ͨ���ȿ���������ĸ������߳�����������������ֻ�к��ٵ���ȷ�����ܱ���⵽����ˣ���ÿ���ϳɲ����в������õķ�˳��򣬲�ͨ�����������Ļ����˽��пɿ��İ�������䣬�� N ��ʹ�ñ���Ⱦ�ϾͿ��ԶԺϳɳ�����м򵥵���֤�����˷��ġ�

07



ʹ���ֿ��������Ӽ����� SPOT �ϳɵ���������

QC on SPOT synthesis using a Rink amide linker

�� MultiPep 1&2 �ϳ����Ϻϳ���������һ�����۶�����Ĵ����ϳ��ĵķ�����������ͨ�������������Һ������ά��Ĥ֧���Ϻϳɵġ����һ�ݳ�������ȣ�Ĥ���һ����ϰ����Ṧ��֮��Ľ���ȶ���������ߡ����ڣ����� 100% �ķ�ʽ֬���ᶼ���ȶ����ڼ��������½��м��Ҳ���ᵼ���ĵ���ʧ�����ּ����ܱ��ѽ����ͷ��ģ����DZ��ֹ������ӣ���˺��ѽ����������ơ�����ڵ�һ��ѭ���������˿��ѽ������壨�� Rink ���������壩���������Ķ������÷�ʽ

֬�����ͷų���������������£������ڲ����ѱ���֮ǰ�г��õ㲢����������


�������:

1. ���������ֲ����úϳɡ�

2. �ںϳɵĵ�һ��ѭ���У��� FMOC-Rink ��������������������ʿ��ġ�***�ʿ��Ŀ���Ĥ�Ǹ����ϳɣ��Ա���ȥ����

3. �ϳɺ󣬴�������ȡ�¸����Ĥ���۲�ߵ�

  • ʹ���ֳ�ʽ�����ߵ�������������һ�㡣Ȼ����Ǧ��Ȧ���ʿص㣬�ٴ�Ĥ�ϼ��¡�

  • ���ߣ�Ϊ��ʹ�ߵ����ֳ������ɽ�Ĥ������ DMF ��Һ�е�1% ������С��ߵ�Ӧ���ֵ���ɫ����ǿ�������ж��仯��

4. �����µ��ʿص���� 1.5 mL ������΢�����Ĺܣ��������Թܣ��У����� 150 uL ͨ���ѽ��������ѡ�������ǽ��Թܸǣ����� 2-4Сʱ���⽫ʹ�ĴӸ��Ե��ֿ��������������ѽ⣬��ȥ�������������š�

5. ���������ѽ���ĵ�����Һת�Ƶ�һ���µ�΢�����Ĺ��У�������װ�����ðߵ�����Ĺܡ�

6. ʹ�ñ�׼ʵ���ҳ�����Һ�������Ӧע��ǿ���ʵ�����豸����

7. �� 10 uL 0.1 % �ķ�ʽ֬�������ܸ��ġ�

8. �Ը���Һ���� MALDI����������һ��Ϊ1��L ����١�(ע�� MWΪ -1)

ע������������(TFA)��һ�ֻӷ��Ժ�ǿ���ᡣ�����ѽ�ͼӹ����̱�����ͨ����н��С��ڴ˽׶α��������ȫ�۾������׺Ͱ״�ӣ����������а�ȫ�涨�����з�����밴�չ��ҹ涨���д�����


ͨ���ѽ�����

  • 92.5%(vv)������������TFA

  • 5% (v/v) �����������

  • 2.5% (vv) ˮ

���ڿ��ѽ��� Fmoc ������

Su et al.

Epigenetics&Chromatin volume 7, Article number:7(2014)����� PTM �鵰����΢���кϳ�ʹ�� RespepSL �Զ��ϳ���(Intavis AG��KoIn��Germany,MultiPep 1CEM)�ڸ�����ά���Ϻϳ��ġ���Fmoc�� celluspot ���Ƴ������ Cy3(Lumiprobe,��˾)�󣬾͵õ�����ά��-Cy3 Ⱦ�Ϲ���İߵ���ա��հ�ϸ��ɫ�߶�������ͨ��ȥ��ɫ���ϵ� Fmoc ������ֽ�����ܽ������¶��Ƴɵġ������ģ���ʼż��������Ħ������Fmoc-Ala-OH �� Boc-Ala-OH���Լ�����֬���ز���ߺϳ�������ÿ�κϳɵ��Ķ����пɱ����ѽ�����ڣ��Ա�ͨ����ЧҺ��ɫ�׷������׷�������������(�����ļ� 12:�� S2)�����⻹������ 20 ԭ�ӵľ���ϩ������(PE)(Novabiochem ��˾)������ߺϳ�Ч���������еĵ����ʽ������Fmoc-Glu-(biotinyLPEG)-OH(Novabiochem)����ù�׺��صĶ��ա�

ʹ�ñ�׼�� Fmoc/tBu ��ѧ�������� 13 �������ġ���ǰ������ [24]���ĵ� PTM ���ʵ������ĵ�����ʽ���롣�ϳ���ɺ��� 82.5% ����������(TFA)ȥ��������������:5% ���������5% ˮ:5%���ȼ����еı��ͱ��Ϸ�:2.5%������򴼣����� 90 ����(ÿ����150��)��ȡ����Һ������ 250 �̵� 88.5% ��ʽ֬���ᡢ4% �����׻��ᡢ2.5% ������������ 5% ˮ����������ҹ���ܽ���ά�ء�����Ķ������Գ�������ά�ع��������Σ����ɼ����ӣ�Ȼ�������ܽ⵽100�� �Ķ��׻�����(DMSO)�С�


Boisguerin et al.

Chemistry & Biology, Vol. 11, 449�C459, April, 2004���������� PSD-95 PDZ3-�ṹ���ϵĶ��� NYKQTSVCOOH ���������ѻ�����Ч��[148]������������(10)(�������� 10-12 �ο�ͼ 3.5 (A))���ڼ������ѽ���Ϻϳɵ�(ͨ������Fmoc-Rink ������ʵ�ֿ��ѽ���)��3 Сʱ���÷�ʽ֬���Ὣ�IJ��� h-1��h-2 �� h-3 �ӵ����ѽ⣬���� HPLC �� ESI-MS ���з���(ͼ 3.5 (B))���Է�Ӧ����ķ�������ر������� h-3 �����£�����-������Ӧ��Ч�ʺܸߡ�Ϊ��ȷ�������жԻ���!��������Ӱ�죬�����ֺϳ�������Ĥ�������������:EFHAALGSYVCOOH�� QHIDSQKKACOOH��


���ڵ�ϳɵij�������

1. SPOT �ϳɵ�ʱ����ʲôʱ��?

ʹ��˫ż�������ϳ� 4x384 ��ʱ��ÿ��������Ҫ 2 ��Сʱ���������Ҫ 2-3 ��Сʱ��ÿ�����ڵIJ���ʱ��ԼΪ 30 ���ӣ������Ʊ��������������ϴĤ��

2. Ĥ���ĵ��ܶ��Ƕ���?

��׼�ܶ�Ϊ 10x15 ������ά��ĤƬ�� 600 �����������ĵ����ĵľ���Ϊ 4.2 ���ס�Ҳ�������ɶ������������ڷdz��ܿص������£���ά��Ĥ�ϵ��ܶȿɴ� 25x40 ���㡣

3. һ�����ж�����?

�����ṩ��Ĥ�����������������백���ĸ�����ԼΪ 300-400 nmol/cm2��ÿ���ߵ�ĸ�������ͨ���������ó���

����:һ��ֱ��Ϊ6���׵ĵ�Լ�� 80 ��Ħ�����ģ�һ��ֱ��Ϊ3 ���׵ĵ�Լ�� 20 ��Ħ�����ġ�

4. �� CelluSpots �ϳɹ����У�Ӧѡ������Ʒ�Ƶ���ֽ���ڿ����?

����ʹ�� Whatman 540 �� 541

5. ������������������ںϳ�?

��ȡ Fmoc-LyS(Ac)-OH��CAS#159766-56-0���������� MultiPep 1&2 ��ͬ�ı�׼ż����������ż����

6. Ahx���Ӽ�����ˮ�Զ�Ӧ����ʲô?

����ʹ�� Fmoc-8-����-3,6-���������ᡣ

7. ������С��ģ�˰�ϳɵIJ���?

ʹ�� Ramage ��֬(PC-01-0601)����С�����ѽ⼦β�ƿ������ѽ��ġ�

8. ���ʹ�� MultiPepRSi �� RespepSL �ϳ� PNA ʹ����������:

PNA ���壺0.3M �� NMP ��ʹ������ż����

�����HATU �� PyAOP(0.6M ��Һ);HATU ���ȶ���PyAOP Ӧÿ����¡�

�����DIPEAV2,6-lutidine(1.2/1.8M��DMF ��)�����ּ��� DMF �еĻ�ϱ���Ϊ20.09%(vvv)��

9. ����������?

�����кϳɵ����У���������Լռ 1%����������ʹ�ĸ����ȶ����Ӷ����´����۵����������ω���鰱�ω�ᷢ�����������鰱�ω��� 50C ����ߵ��¶��º����׷�����������DIC �� OxymaPure ����Ͽɼ�����������PyOxim �� NMM ����ϸ��׷����������������� HBTU �� NMM ����ϡ�

10. ��μ����ѱ����������춬������γ�?

�������ϳɹ����У��� 20% ������� DMF���� 0.1M HCOOH���ж� Fmoc ���Ž����ѱ������Ա����춬���ǰ�����Ӧ��

11. ��δ� SPOT Ĥ���ѽ����?

ʹ�� Fmoc ���Ӽ���Ϊ��һ�������ᡣ�г�����ĵ㲢Ϳ���ѽ�Һ��Rink-Linker �������ѽⲢ���� C ��������

12. �ҵ� SPOT ������һ���� N ���������������ˡ���α����������?

���һ��������ʹ���嶡���ʻ������ᡣ�������Ա�����ֽ����ֽ�·�ͨ���е�΢�������������������

13. �ܽ��� NMP �İ�������Ա�����?

�����װ��ω�͵������⣬��������Һ���� 4�� �±���һ���¡���ע�⣬�����δ���ʣ������ω�͹Ȱ��ω�����������

ȫ������/��Ѷ���� ��ϵ���䣺[email protected]
��Ȩ����������
1��������ע��"��Դ���DZ���"��������Ʒ����Ȩ�������DZ�����δ��������Ȩ����ת�ء�ժ�������������ʽʹ��������Ʒ���Ѿ�������Ȩʹ����Ʒ�ģ�Ӧ����Ȩ��Χ��ʹ�ã���ע��"��Դ���DZ���"��Υ�����������ߣ�������׷������ط������Ρ�
2������ת�ز�ע����������Դ����Ʒ��Ŀ�����ڴ��ݸ�����Ϣ����������������ͬ��۵��֤ʵ�����ݵ���ʵ�ԣ����е�������Ʒ��Ȩ��Ϊ��ֱ�����μ��������Ρ�����ý�塢��վ����˴ӱ���ת��ʱ�����뱣������ע������Ʒ��Դ�����Ը���Ȩ�ȷ������Ρ�
3�����漰��Ʒ���ݡ���Ȩ�����⣬������Ʒ����֮����һ�����뱾����ϵ��������Ϊ�������Ȩ����
4��������Ͷ�塢ת����Ȩ��������ˣ�����ϵ������
��ϵ����

�ͷ�����: 0571-87759942

��������: 0571-87756399

ý�����: 0571-87759945

Ͷ������: 0571-87759942

��ע����
  • �����DZ�վAPP

  • Ybzhan�ֻ���

  • Ybzhan���ں�

  • YbzhanС����